在藥品研發(fā)生產(chǎn)中，藥品安全有效始終都是擺在第一位的，不過藥品在臨床使用中產(chǎn)生的不良反應(yīng)除與該藥品本身的藥理活性有關(guān)外，也有一部分與藥品中所混入的其它雜質(zhì)有關(guān)。保證藥品質(zhì)量穩(wěn)定可控，藥品的純度就是一個重點。如何確定雜質(zhì)的限度是藥學(xué)研究人員與審評人員不能回避的關(guān)鍵問題，該限度的制訂是否科學(xué)、合理，直接關(guān)系到藥品的安全性與質(zhì)量。
今天，桐暉小君將從藥品中雜質(zhì)的定位、分類、藥品標(biāo)準(zhǔn)中雜質(zhì)的檢測確定、相關(guān)檢測方法及檢測設(shè)置等角度入手，與大家一起交流關(guān)于雜質(zhì)的那些事。
藥物的雜質(zhì)是指藥物中存在的無治療作用或者影響藥物的穩(wěn)定性、療效,甚至對人體的健康有害的物質(zhì)。
藥物中的雜質(zhì)主要有兩方面的來源：一方面是由藥物生產(chǎn)過程中引入;另一方面是在貯存過程中受外界條件的影響，引起藥物理化性質(zhì)發(fā)生改變而產(chǎn)生。當(dāng)然，藥物受到污染等也會引入雜質(zhì)。
在藥物的研究、生產(chǎn)、貯存和臨床應(yīng)用等方面，必須保持藥物的純度，降低藥物的雜質(zhì)，這樣才能保證藥物的有效性和安全性。
一、藥物雜質(zhì)分類
藥品雜質(zhì)通常分為：有機雜質(zhì)、無機雜質(zhì)、殘留溶劑。
有機雜質(zhì)可在藥品的生產(chǎn)或貯存中引入，也可由藥物與輔料或包裝材料的相互作用產(chǎn)生，這些雜質(zhì)可能是已鑒定或未鑒定的，揮發(fā)性的或非揮發(fā)性的，包括起始原料、中間體、副產(chǎn)物、降解產(chǎn)物、試劑、配位體、催化劑等?；瘜W(xué)結(jié)構(gòu)與活性成分類似或具有淵源關(guān)系的有機雜質(zhì)，通常稱為有關(guān)物質(zhì)。
無機雜質(zhì)可能來源于生產(chǎn)過程，如反應(yīng)試劑、配位體、催化劑、元素雜質(zhì)、無機鹽或其他物質(zhì)(如過濾介質(zhì)、活性炭等)，一般是已知和確定的。
藥品中的殘留溶劑系指原料藥或輔料的生產(chǎn)中以及制劑制備過程中使用的，但在工藝操作過程中未能完全去除的有機溶劑，一般具有已知的毒性。
由于雜質(zhì)的種類較多，控制策略和控制方法也很多。根據(jù)質(zhì)量源于設(shè)計的理念，雜質(zhì)控制點可分為源頭控制、過程控制、終點控制?？刂品椒ㄓ卸喾N，例如性狀、晶型、熔點、比旋度、異構(gòu)體、有關(guān)物質(zhì)、殘留溶劑、氯化物、硫酸鹽、pH值、溶液顏色和澄清度、熾灼殘渣、重金屬、元素雜質(zhì)、基因毒性雜質(zhì)等。在每個方法中都需要考慮控制目標(biāo)(即測什么)、控制方法(用什么方法測)和控制限度(控制標(biāo)準(zhǔn)如何制定)。
二、雜質(zhì)的限量檢查方法
雜質(zhì)的限量是指藥物中所含雜質(zhì)的最大允許量。藥典規(guī)定的雜質(zhì)檢查主要為限量檢查。檢查時，一般不需測出雜質(zhì)的準(zhǔn)確含量，只要雜質(zhì)的含量控制在限量范圍內(nèi)，即為合格。
藥物中雜質(zhì)的限量控制有三種方法：對照法、靈敏度法和比較法，對照法應(yīng)用廣泛。
(1) 對照法
對照法取一定量被測雜質(zhì)的純物質(zhì)或?qū)φ掌放涑蓸?biāo)準(zhǔn)溶液，與一定量供試品配成的供試液經(jīng)同樣處理后，比較二者的反應(yīng)結(jié)果，從而確定所含雜質(zhì)是否超過限量規(guī)定。使用此類方法時，需注意平行原則，供試品溶液和標(biāo)準(zhǔn)溶液應(yīng)在完全相同的條件下反應(yīng)，如加入的試劑、反應(yīng)的溫度、放置的時間等均應(yīng)相同。只有這樣，反應(yīng)的結(jié)果才有可比性。
(2) 靈敏度法
靈敏度法即在供試品溶液中加入試劑，在一定條件下反應(yīng)，觀察有無正反應(yīng)出現(xiàn)，以不出現(xiàn)正反應(yīng)為合格，即以該檢測條件下反應(yīng)的靈敏度來控制雜質(zhì)限量。如純化水中氯化物的檢查是在50ml樣品中加入稀硝酸和硝酸銀試液，不得發(fā)生渾濁。本法不需對照品。
(3) 比較法
比較法是對某些測定數(shù)值(如pH值、熾灼殘渣量、干燥失重量、吸收度等)要求不得超過其限量值或范圍。如注射用青霉素鈉在105℃干燥減失重量不得過1.0%。本法不需對照品。
三、藥物雜質(zhì)的控制
藥物中的所有雜質(zhì)都會不同程度地影響藥物的穩(wěn)定性和安全性,因此有必要在藥物的生產(chǎn)和貯存過程中嚴(yán)格的控制藥物雜質(zhì)的含量，雜質(zhì)檢查是控制藥物質(zhì)量的一項重要指標(biāo)。藥物的雜質(zhì)檢查分為一般雜質(zhì)檢查和特殊雜質(zhì)檢查。
1.一般雜質(zhì)檢查
對于一般雜質(zhì)的檢查,中國藥典規(guī)定了氯化物、硫酸鹽、硫化物、硒、氟、氰化物、鐵鹽、重金屬、砷鹽、銨鹽以及酸堿度、澄清度、溶液的顏色、干燥失重、水分、熾灼殘渣、易炭化物、有機溶劑殘留量等項目的檢查方法及限度。
2.特殊雜質(zhì)的檢查
特殊雜質(zhì)通常是指藥物在生產(chǎn)和貯存過程中,因為藥物的性質(zhì)、生產(chǎn)方式和工藝條件等因素而引入的雜質(zhì)。這類雜質(zhì)隨藥物的不同而不同，由于特殊雜質(zhì)多種多樣，所以檢查方法也不盡一致，常用的方法有以下幾種:
物理法
利用藥物與雜質(zhì)在嗅、味、揮發(fā)性、顏色、溶解性及旋光性等方面的差異,檢查所含有的雜質(zhì)是否符合雜質(zhì)限量規(guī)定。
化學(xué)反應(yīng)法
化學(xué)反應(yīng)法通常有容量分析法、重量分析法、比色法和比濁法等方法。
化學(xué)分析法
常用的有紫外分光光度法、毛細(xì)管區(qū)帶電泳法(CZE)、高效毛細(xì)管電泳法(HPCE)。如用紫外分光光度法檢測三磷酸胞苷二鈉在280nm與260nm波長處測吸收度,比值應(yīng)為2.00~2.20;用HPCE分離測定枸櫞酸托瑞米芬的Z、E異構(gòu)體及四環(huán)素中的雜質(zhì)脫水四環(huán)素、脫水差向四環(huán)素和金霉素等。
色譜法
這是目前最常用也是最有效的藥物雜質(zhì)分析方法,由于靈敏度高、準(zhǔn)確性好、簡單、易行、快速高效等特點,現(xiàn)越來越多的被各國藥典用于控制藥物的雜質(zhì)。
1.紙層析法(P.C)
取一定量的供試品雜質(zhì)限量對照溶液,于同一色譜濾紙上點樣,展開后比較雜質(zhì)斑點的個數(shù)、顏色或熒光強度等。通常用于極性較大的藥物或放射性藥物的雜質(zhì)檢查,該法展開時間長、斑點較為擴散、不能用強酸等腐蝕性顯色劑,因此應(yīng)用范圍較小。
2.薄層層析法(TLC)
類似P.C法,由于方法簡便易行,只需較少的實驗設(shè)備,在藥物雜質(zhì)檢查中應(yīng)用十分廣泛,在各國藥典中都有多種藥物采用此方法檢查藥物的雜質(zhì)。一般將與主藥有密切相關(guān)的原料、中間體、副產(chǎn)物或分解產(chǎn)物等特殊雜質(zhì)稱為有關(guān)物質(zhì),將甾體類藥物中的特殊雜質(zhì)稱為其它甾體。TLC常用目視比較法確定藥品中雜質(zhì)的含量是否超出限量,這只是一種半定量的方法,同時由于靈敏度受操作條件影響較大,所以有時候難以滿足快速分析的需要。
3.高效液相色譜法(HPLC)
作為一種比較成熟的方法因其分離效能高、專屬性強和檢測靈敏等特點已被廣泛應(yīng)用于藥物的雜質(zhì)檢查中,其檢測雜質(zhì)的靈敏度可達(dá)到0.1%或者更低,并可獲得很好的準(zhǔn)確度和精密度,且重復(fù)性好?？梢愿鶕?jù)不同的分析對象選擇不同分離機制的色譜類型,如正相、反相、分配等,如用HPLC法測定頭孢哌酮鈉,在測定頭孢哌酮鈉效價的同時可以對雜質(zhì)、及其光學(xué)異構(gòu)體進(jìn)行分離定量;通過HPLC法可以將鹽酸西替利嗪與雜質(zhì)[(4-氯苯基)苯基甲基]哌嗪完全分離等。但HPLC法也有一些不足之處,如缺乏通用、靈敏的檢測器,反相HPLC色譜柱的填料只能在一定的pH范圍內(nèi)使用,分析堿性藥物時易產(chǎn)生拖尾;另外對強保留物質(zhì)的分析時保留時間過長,如對沙丁胺醇及雜質(zhì)分析時,biserher的保留時間超過了30min等。這些缺點限制了HPLC在藥物雜質(zhì)檢查中的應(yīng)用。
4.氣相色譜法(GC)
主要用于揮發(fā)性有機雜質(zhì)和有機溶劑殘留量的檢查,特別是對中藥的有機農(nóng)藥的殘留檢查更為有效。如用GC法測定甲硝唑中環(huán)氧乙烷的殘留量;用毛細(xì)管GC法測定吡喹酮中5種有機溶劑乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯、苯的殘留量等。
其它色譜法如膠囊電動力學(xué)色譜法(MEKC)、離子色譜法(IC)等方法?？梢杂肐C法分離BMS-181866-02中的amylamine和BMS-188494-04中的三丁醇胺。